2'-O-metyyli-rA(N-Bz)fosforamidiitti

2'-O-Metyyli-rA(N-Bz) Fosforamidiitti on modifioitu fosforamidiittimonomeeri, jota voidaan käyttää oligonukleotidisynteesiin. 2'-O-metyylimodifikaatio antaa huomattavan nukleaasiresistenssin oligonukleotideille samalla, kun se säilyttää RNA/RNA-dupleksien vetysidosominaisuudet uskollisemmin kuin DNA/RNA-hybridien. RNA-interferenssisovelluksissa (RNAi) 2'-O-metyyli-rA(N-Bz)-fosforamidiittia sisällytetään usein pienten häiritsevien RNA:n (siRNA) dupleksien sense- ja antisense-säikeisiin parantamaan seerumin stabiilisuutta ja vähentämään kohteen ulkopuolisia vaikutuksia vaarantamatta RNAi-aktiivisuutta. 2'-O-Metyyli-rA(N-Bz) Fosforamidiitti toimii myös kriittisenä rakennuspalikkana RNA-oligonukleotidien kemiallisessa synteesissä, jotka sisältävät paikkaspesifisiä 2'-O-metyyliadenosiinimodifikaatioita; suojaryhmät (DMT kohdassa 5', Bz kohdassa N6, CE-fosforamidiitti kohdassa 3') mahdollistavat RNA-säikeiden vaiheittaisen kokoamisen erittäin tarkasti ja ohjauksen automatisoiduilla DNA/RNA-syntetisaattoreilla. RNA-terapian lisäksi 2'-O-metyyli-rA(N-Bz)-fosforamidiitti on löytänyt sovelluksen fosfaattihaarautuneiden RNA-mallien synteesissä epätavallisten RNA-arkkitehtuurien tutkimiseen ja termisesti stabiloitujen fluoresoivien oligonukleotidikoettimien valmistukseen.

Tuoteparametrit

Miksi Cosperpharm? – Kilpailuetumme

Tuotteen edut

1. 2'-O-metyylimuunnos nukleaasiresistenssiin ja lämpöstabiilisuuteen

2'-O-metyylimodifikaatio riboosin 2'-asemassa on yksi laajimmin validoiduista kemiallisista modifikaatioista oligonukleotiditerapiassa. Oligonukleotidit, jotka sisältävät 2'-O-metyyli-rA(N-Bz)-fosforamidiittia, osoittavat huomattavasti parempaa vastustuskykyä endo- ja eksonukleaaseja vastaan ​​verrattuna modifioimattomaan RNA:han, ja RNA/RNA-dupleksien lämpöstabiilisuus paranee (lisääntynyt Tm) vaarantamatta Watson-Crick-emässpesifisyyttä. Tämä modifikaatio on onnistuneesti otettu käyttöön FDA:n hyväksymissä oligonukleotidilääkkeissä ja lukuisissa kliinisen vaiheen ehdokkaissa.

2. N6-bentsoyylisuojaus korkean tarkkuuden synteesiin

Adeniiniemäksen N6-eksosyklisessä amiinissa oleva bentsoyyli (Bz) suojaava ryhmä estää ei-toivotut sivureaktiot fosforamidiitin kytkentäsyklin aikana, kuten depurinaation tai asyloinnin aiheuttamat haarautumis- tai ketjun päättymistapahtumat. Bz-ryhmä poistetaan puhtaasti normaaleissa oligonukleotidin suojauksenpoisto-olosuhteissa (väkevä ammoniakki, 55 °C, 8–16 tuntia tai AMA), jolloin saadaan natiivi adeniiniemäs ilman havaittavia sivutuotteita.

3. C3′-Endo Sugar Conformation Esiorganisaatio

2'-O-metyylisubstituutio lukitsee riboosisokerin C3'-endo (pohjoinen) konformaatioon - samaan konformaatioon, jonka RNA omaksui A-muodon duplekseissa. Tämä konformationaalinen esiorganisaatio vähentää entrooppista rangaistusta hybridisaatiossa komplementaarisiin RNA-kohteisiin, mikä johtaa korkeampaan sitoutumisaffiniteettiin (suurempi Tm) 2'-O-metyylimodifioituihin oligonukleotideihin verrattuna saman sekvenssin DNA:han tai modifioimattomaan RNA:han.

4. Automaattisen synteesin standardisuojausryhmän yhteensopivuus

2'-O-metyyli-rA(N-Bz) Fosforamidiitissa on samat 5'-O-DMT- ja N6-Bz-suojaryhmät, joita käytetään tavanomaisissa RNA-fosforamidiiteissa, sekä β-syanoetyyli (CE) fosforamidiitti 3'-asemassa. Tämä suunnittelu varmistaa saumattoman integroinnin olemassa oleviin automatisoituihin DNA/RNA-syntetisaattorin työnkulkuihin ilman, että vaaditaan erityisiä suojauksenpoistoprotokollia tai modifioituja kytkentäolosuhteita.

5. Laaja terapeuttinen hyöty oligonukleotidialustojen välillä

2'-O-Metyyli-rA(N-Bz) Fosforamidiittia käytetään useilla oligonukleotiditerapeuttisilla alustoilla: siRNA (sense- ja antisense-juosteen modifikaatiot), antisense-oligonukleotidit (ASO:t) geenien hiljentämiseen, aptameerit kohdennettuun kuljetukseen ja diagnostisiin sovelluksiin sekä modifioidut RNA-koettimet molekyylidiagnostisiin sovelluksiin. 2'-O-metyylimodifikaatiota hyödynnetään myös laajasti CRISPR-Cas-ohjaus-RNA:issa vakauden ja muokkaustehokkuuden parantamiseksi.

Sovellusskenaariot

1. siRNA:n terapeuttinen kehitys

2'-O-Metyyli-rA(N-Bz) Fosforamidiittia käytetään tuomaan 2'-O-metyyliadenosiinimodifikaatioita pienten häiritsevien RNA (siRNA) -dupleksien sense- ja/tai antisense-säikeisiin parantamaan seerumin stabiilisuutta, vähentämään RNAi-koneiston välittämiä sivuvaikutuksia (esim. aktivointi). 2'-O-metyylimodifikaatio on monien kliinisesti edistyneiden siRNA-alustojen vakiokomponentti.

2. Antisense-oligonukleotidien (ASO) valmistus

2'-O-metyyli-rA(N-Bz) Fosforamidiitti on laajalti sisällytetty antisense-oligonukleotideihin geenien vaimentamiseen. 2'-O-metyylimodifikaatio antaa nukleaasiresistenssin ASO:ille biologisissa nesteissä ja lisää sitoutumisaffiniteettia komplementaarisiin RNA-kohteisiin häiritsemättä RNaasi H -välitteisiä pilkkoutumismekanismeja (kun se on sijoitettu 2'-O-metyyli/2'-deoksi gapmer -malleihin).

3. RNA-oligonukleotidin kemiallinen synteesi

2'-O-metyyli-rA(N-Bz) Fosforamidiitti toimii rakennuspalikkana RNA-oligonukleotidien kiinteän faasin kemiallisessa synteesissä, jotka sisältävät paikkaspesifisiä 2'-O-metyyliadenosiinitähteitä. Suojaryhmät (5'-O-DMT, N6-Bz, CE-fosforamidiitti) ovat yhteensopivia standardien RNA-synteesisyklien ja suojauksenpoistoolosuhteiden (NH₃, 55°C, 8–16 h tai AMA) kanssa mahdollistaen saumattoman integroinnin vakiintuneisiin synteesityönkulkuihin.

4. Fluoresoiva oligonukleotidikoetinsuunnittelu

2'-O-metyylimodifikaatiot parantavat reaaliaikaisessa PCR:ssä ja in situ -hybridisaatiossa käytettävien fluoresoivien koettimien (esim. molekyylimajakat, TaqMan-koettimet) lämpöstabiilisuutta. 2'-O-Metyyli-rA(N-Bz) Fosforamidiitti mahdollistaa stabiloivien modifikaatioiden lisäämisen koetinsekvensseihin, mikä lisää signaali-kohinasuhdetta ja mahdollistaa vähäisen RNA-kohteiden tehokkaamman havaitsemisen.

5. Aptameerin kehitys Kemiallisesti muunneltuja aptameereja sisältäviä

2'-O-metyylinukleotideilla on parantunut nukleaasiresistenssi, pidentynyt in vivo -puoliintumisaika ja parantunut kohdesitoutumisaffiniteetti verrattuna modifioimattomiin RNA-aptameereihin. 2'-O-metyyli-rA(N-Bz) Fosforamidiitti on keskeinen rakennuspalikka 2'-O-metyylimodifioitujen aptameerikirjastojen luomisessa kiinteäfaasisynteesin kautta.

6. CRISPR-Cas Guide RNA (gRNA) -muokkaus

CRISPR-Cas-gRNA:iden tiettyihin kohtiin sijoitetut 2'-O-metyylimuunnokset voivat parantaa vakautta, vähentää immunogeenisyyttä ja parantaa muokkaustehoa soluissa ja in vivo. 2'-O-metyyli-rA(N-Bz) Fosforamidiitti mahdollistaa 2'-O-metyyliadenosiinitähteiden paikkaspesifisen viemisen kemiallisesti syntetisoituihin gRNA:ihin.

7. Fosfaattihaarautunut RNA-tutkimus

Epätavallisia RNA-arkkitehtuureja, kuten fosfaattihaarautunutta RNA:ta, tutkivat tutkijat käyttävät 2'-O-metyyli-rA(N-Bz)-fosforamidiittia valmistaakseen mallioligonukleotideja, jotka sisältävät yhden vapaan 2'-OH-ryhmän haarautuneiden fosfotriesterisidosten hydrolyyttisen stabiilisuuden tutkimiseksi.

8. Modifioitujen oligonukleotidien lämpöstabiilisuustutkimukset

2'-O-metyyli-rA(N-Bz) Fosforamidiittia käytetään modifioitujen oligonukleotididupleksien lämpöstabiilisuuden (Tm) systemaattisissa tutkimuksissa, mukaan lukien 2'-O-metyylimodifikaatioiden sijaintivaikutusten karakterisointi dupleksin sulamislämpötilaan ja hybridisaatiotermodynamiikkaan.

9. Kiinteän faasin oligonukleotidisynteesi

Prosessin kehittäminen Prosessikemistit ja oligonukleotidisynteesin asiantuntijat käyttävät 2'-O-metyyli-rA(N-Bz)-fosforamidiittia kytkentäolosuhteiden, suojauksenpoistoprotokollien ja puhdistusmenetelmien optimoimiseen 2'-O-metyylimodifioitujen nukleiinihappoterapeuttisten lääkkeiden laajamittaisessa valmistuksessa. Cosperpharm tarjoaa eräkohtaisia ​​analyyttisiä tietoja prosessien validoinnin ja skaalaamisen tukemiseksi.

10. Analyyttisten menetelmien kehittäminen oligonukleotidien laadunvalvontaa varten

2′-O-Metyyli-rA(N-Bz) Fosforamidiittia käytetään vertailustandardina HPLC- ja LC-MS-menetelmien kehittämisessä modifioitujen nukleosidipitoisuuksien kvantifiointiin oligonukleotidilääkkeissä ja lääketuotteissa sekä synteesiin liittyvien epäpuhtauksien (esim. hapettumisen sivutuotteen DMT:n, epätäydellisten puristustuotteiden poistotuotteiden) tunnistamiseen.

Ota yhteyttä

Tarvitsetko luotettavaa, erittäin puhdasta 2'-O-metyyli-rA(N-Bz)-fosforamidiittia seuraavaan oligonukleotidisynteesiprojektiisi? Cosperpharm-tiimi on valmis auttamaan sovellukseesi räätälöityjen tuotespesifikaatioiden, dokumentointitarpeiden ja toimitusketjuratkaisujen kanssa.