5-aminofluoreseiini

5-aminofluoreseiinia (kutsutaan myös 5-AF:ksi tai fluoreseiiniamiiniksi) käytetään laajalti fluoresoivana leimausreagenssina. 5-aminofluoreseiinin primaarinen amiini voi reagoida karboksyyliryhmien (EDC/NHS-aktivoinnin kautta), aldehydien, ketonien tai aktivoitujen esterien (esim. NHS-estereiden) kanssa muodostaen stabiileja amidi- tai imiinisidoksia. Sillä on viritysmaksimi ~490 nm:ssä (λmax = 496 nm boraattipuskurissa pH 8,5) ja emissiomaksimi ~515 nm:ssä, mikä tuottaa kirkkaan vihreän signaalin, jolla on hyvä fotostabiilisuus ja Stokes-siirtymä noin 40 nm. Sen fluoresenssin intensiteetti on pH-riippuvainen, ja se kasvaa huomattavasti alkalisissa olosuhteissa (pH 8-9), mikä johtuu aminoryhmän protonaatiotilan muutoksista.

5-aminofluoreseiinia on käytetty laajasti biologisessa ja lääketieteellisessä tutkimuksessa – proteiinien ja vasta-aineiden leimaamisesta kohdennettujen lääkkeenantojärjestelmien ja fluoresoivien sensorien rakentamiseen. 5-aminofluoreseiini on myös keskeinen välituote fluoreseiini-isotiosyanaatin (FITC Isomeeri I) synteesissä, joka on yksi suosituimmista proteiinileimausreagensseista.

Tuoteparametrit

Valmistelu ja säilytys

5-AF syntetisoidaan tyypillisesti alkaen 4-nitroftaalihaposta, jota seuraa pelkistys (esim. hydratsiinilla/FeOOH:lla) ja kondensaatio resorsinolilla metaanisulfonihapossa. Raakatuote on 5- ja 6-isomeerien seos, jotka erotetaan kiteyttämällä. Nykyaikaiset menetelmät (mikroaaltoavusteiset tai entsymaattiset) voivat parantaa satoa ja vähentää sivutuotteita. Lopullinen puhdistus HPLC:llä varmistaa ≥ 95 % puhtauden, ja rakenne vahvistetaan NMR:llä ja MS:llä.

Varastointi – Seos on herkkä valolle, ilmalle ja kosteudelle. Säilytä suljetussa, argonilla puhdistetussa astiassa 4°C:ssa pimeässä. Pitkäaikaiseen varastointiin (>6 kuukautta) suositellaan -20°C jauheena (stabiili vähintään 3 vuotta). DMSO:ssa olevia liuoksia voidaan säilyttää -80 °C:ssa 6 kuukautta tai -20 °C:ssa 1 kuukauden ajan. Vältä toistuvia pakastus-sulatusjaksoja. Kuljetus ympäristön lämpötilassa on hyväksyttävää, jos se on suojattu valolta ja kosteudelta.

Usein kysytyt kysymykset (FAQ)

K1: Mitä eroa on 5-aminofluoreseiinin (5-AF) ja FITC:n välillä? Miten valitsen?

V: Molemmat ovat vihreitä fluoresoivia väriaineita, mutta niiden reaktiiviset ryhmät ovat erilaisia.

● 5-AF:ssä on primaarinen amiini (–NH₂). Se vaatii kohteen karboksyyliryhmän aktivoinnin (EDC/NHS:n avulla) ennen konjugointia. Paras karboksyyliryhmän sisältävien molekyylien leimaamiseen.

● FITC:ssä on isotiosyanaattiryhmä (–N=C=S), joka reagoi suoraan kohteen amiinien kanssa (esim. lysiinitähteet proteiineissa) – aikaisempaa aktivointia ei tarvita. FITC on kätevämpi rutiininomaiseen proteiinileimaukseen.

● Valitse 5‑AF, jos tarvitset tietyn suunnatun konjugaation (esim. karboksyylikahvan kautta) tai jos aiot syntetisoida mukautettuja fluoresoivia johdannaisia. FITC on yleensä yksinkertaisempi suorassa vasta-aineleimauksessa.

Q2: Mitkä ovat tyypilliset reaktio-olosuhteet biomolekyylien leimaamiseksi 5-AF:llä?

V: Yleisin menetelmä on amidikytkentä: aktivoi kohdemolekyylin karboksyyliryhmät EDC:llä ja NHS:llä (MES- tai PBS-puskurissa, pH 5,5–6,5), lisää sitten 5-AF ja säädä pH arvoon 7,5–8,5. Inkuboi huoneenlämmössä tai 37°C:ssa 2–4 ​​tuntia. Käytä aldehydiä sisältäville kohteille (esim. glykoproteiineille) pelkistävää aminointia natriumsyaaniboorihydridillä. Reagoimaton väriaine voidaan poistaa suolanpoistolla tai dialyysillä. Väriaineen ja proteiinin moolisuhde 5:1 - 20:1 on hyvä lähtökohta.

Miksi Cosperpharm? – Kilpailuetumme

Ota yhteyttä

Tarvitsetpa sitten pienen näytteen pilottikokeilua varten tai suuria määriä kaupalliseen tuotantoon, Cosperpharm on valmis auttamaan sinua. Ota yhteyttä jo tänään keskustellaksesi vaatimuksistasi 5-aminofluoreseiinille – ja katsotaan, kuinka voimme auttaa viemään projektiasi eteenpäin.